📘 Fiche de cours
L'essentiel du cours
Le génie génétique regroupe les techniques permettant de modifier le génome d'un organisme. Les étapes clés sont :
- Isolement du gène : Utilisation d'enzymes de restriction pour couper l'ADN.
- Insertion : Intégration du gène dans un vecteur (plasmide) grâce à la ligase pour former un ADN recombinant.
- Transformation : Introduction du vecteur dans une cellule hôte (ex: E. coli).
- Sélection : Identification des cellules ayant intégré le gène (souvent par des gènes de résistance aux antibiotiques).
Méthodes à maîtriser
- Lecture de cartes de restriction : Savoir où couper un plasmide pour insérer un gène.
- Analyse d'électrophorèse : Déterminer la taille des fragments d'ADN (plus le fragment est petit, plus il migre loin).
- Principe de la PCR : Dénaturation ($95^\circ C$), hybridation des amorces ($50-60^\circ C$), élongation ($72^\circ C$).
Exemples corrigés
Exemple : Un plasmide de 5kb possède un site de coupure unique pour EcoRI. Après digestion, on obtient un fragment linéaire de 5kb. Si on insère un gène de 2kb, le nouveau plasmide fera 7kb.
Erreurs fréquentes
- Confondre enzyme de restriction (coupe) et ligase (colle).
- Oublier que la PCR nécessite des amorces spécifiques.
- Penser que la transformation réussit à 100% des cas (d'où l'importance de la sélection).